RNA提取

  本试剂盒适合于从血清、细胞上清、淋巴液中提取 RNA 病毒基因组，不适合于细胞等组织内 RNA 病毒基因组的提取。使用本试剂盒提取的基因组 RNA 可用于 RT-PCR 实验。

  操作步骤：

  使用前请先在漂洗液中加入一瓶新开启的无水乙醇，加入到离瓶口约 0.5-1cm 距离，盖好摇匀。所有离心步骤均在 2-8℃条件下进行。

  1、 取病毒上清液 0.5ml，12000rpm 离心 5min，尽量吸尽上清使用，弃去沉淀(如无沉淀可省去此步)。

  2、 向病毒上清中加入 20ul 10mg/ml 的蛋白酶 K，充分混匀，65℃消化 10min，期间可颠倒离心管混匀数次。

  3、 吸附柱前处理： 从包装中取出吸附柱， 放入收集管中， 加入 700ul 洗柱液， 室温放置 2 分钟， 2-8℃ 12000rpm 离心 2min，弃废液，将吸附柱放入收集管中待用。

  4、 向病毒上清中加入 500ul 结合液，充分混匀。再向管中加入 400ul 无水乙醇，充分混匀，此时可能会出现絮状沉淀，不影响 RNA 的提取，可将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中，静置 2min。 (吸附柱的大容积为 750ul，可分两次加入。一次吸附完离心后再将余下的混合液体加入柱中静置离心。 )

  5、 12000rpm 离心 2min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

  6、 向吸附柱中加入 700ul 漂洗液( 使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm 离心 1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

  7、 向吸附柱中加入 500ul 漂洗液，12000rpm 离心 1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

  8、 12000rpm 离心 2min，将吸附柱置于室温或 50℃温箱放置数分钟，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR 等。

  10、将吸附柱放入一个干净的离心管中，向吸附膜中央悬空滴加 50ul-100ul 经 65℃水浴预热的 RNase freeddH2O，室温放置 5min，12000rpm 离心 2min。即可得到高质量的病毒基因组 RNA。

  注意事项：

  1、经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌，可能导致 RNase 污染。使用无 RNase 的塑料制品和枪头避免交叉污染。

  2、样品应避免反复冻融，否则会导致提取的 RNA 提取量也下降。

  3、若结合液中有沉淀，可在 37℃水浴中重新溶解。

  4、如果样品消化不*，后面的离心步骤中可能会出现堵柱子的情况，可适当延长离心时间。

  5、洗脱缓冲液的体积好不少于 50ul，体积过小会影响回收效率。

  6、RNA 产物应保存在-70℃，以防 RNA 降解。

  7、RNA 检测：得到的基因组 RNA 片段的大小与病毒的保存条件和种类等因素有关。由于病毒不含有核糖体RNA， 所以常规电泳无法检测， 只有后期实验才可检测到。 D260值为1相当于大约40 μg/ml单链RNA。

  总RNA提取试剂盒订购说明：

  1、绝大部分产品备有现货，一般情况下都能订货当日发货。

  2、部分非常用产品，需提前1-2日预订，海外期货则需要提前3-6周预订。

  3、部分产品价格会因货期、批次等因素发生变化，若有变动以订货当日新价格为准。

  4、每日订单截止时间为16点整，部分城市可到17点整，因超过截止时间造成当日不能发货的将于次日安排发货。

  5、请办理完货款后，将收据、底单等连同收货人的地址、姓名、等以传真、、短信、等形式通知我们。

  运输说明：

  1、极低温产品：极低温产品运输过程中加装干冰运输。用干冰把产品包裹起来，再用泡沫盒密封，胶带层层粘住泡沫盒，放入索莱宝的箱子，然后交付给合作快递，安全快速高效放心的送客户的手中，保证产品的性质稳定如一，为您的实验保驾护航。

  2、低温产品：低温产品运输过程中加装索莱宝冰袋运输。事先用冰袋把产品包裹起来，再使用泡沫盒密封，用胶带严实密封泡沫盒，再放入索莱宝的箱子(保温效果少可以持续一周)，然后交付给合作快递，安全快速高效放心的送客户的手中，保证产品的性质稳定如一，为您的实验保驾护航。

  3、常温产品：常温产品运输过程中无需加冰或者特殊包装。产品由公司库房人员快速配货，准确快速高效的快递保证产品快速送达您的手中。

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