Solarbio生产的细胞凋亡荧光Hoechst 33342 /PI 双染试剂盒为您提供了一种经典而又快速简便的细胞凋亡与细胞坏死检测方法。 本试剂盒采用Hoechst 33342和Propidium Iodide，PI)双染的方法。细胞发生凋亡时，染色质会固缩。Hoechst33342可以穿透细胞膜，染色后凋亡细胞荧光会比正常细胞明显增强。(PI)不能穿透细胞膜，对于具有完整细胞膜的正常细胞或凋亡细胞不能染色。而对于坏死细胞，其细胞膜的完整性丧失，(PI)可以染色坏死细胞。上述两种染料双染后，使用流式细胞仪或荧光显微镜检测时，正常细胞为弱红色荧光+弱蓝色荧光，凋亡细胞为弱红色荧光+强蓝色荧光，坏死细胞为强红色荧光+强蓝色荧光。参考下图，左图为诱导凋亡前的正常细胞，右图为诱导凋亡后的细胞。
染色快速方便，两种染料的染色仅需20-30分钟，一步染色即可完成。 使用方便，使用流式细胞仪检测时，无需稀释等配制过程，也无需再准备其它任何溶液。 本试剂盒足够检测100个样品，每个样品的细胞数量可以为1×105-1×106。
使用说明：
1. 每个样品收集约10-100万细胞于1.5ml离心管内，离心弃上清。细胞沉淀用0.8-1ml细胞染色缓冲液重悬。
2. 加入5微升Hoechst染色液。
3. 加入5微升PI染色液。
4. 混匀，冰浴或4℃孵育20-30分钟。
5. 用流式细胞仪检测红色荧光和蓝色荧光。
6. 如果使用荧光显微镜检测，检测前离心沉淀细胞，用PBS洗涤一次，再涂片观察红色荧光和蓝色荧光。对于贴壁细胞使用荧光显微镜检测，可以不收集细胞，直接依次按照上述比例加入细胞染色缓冲液、Hoechst染色液和PI染色液冰浴或4℃染色20-30分钟。染色后PBS洗涤一次，再在荧光显微镜下观察。
注意事项：
需使用流式细胞仪进行红色和蓝色双荧光检测。也可使用荧光显微镜检测。 染色后宜尽快检测。
Hoechst 33342对人体有害，(PI)对人体有刺激性，请注意适当防护。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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